Nature.com ला भेट दिल्याबद्दल धन्यवाद.तुम्ही वापरत असलेल्या ब्राउझर आवृत्तीमध्ये मर्यादित CSS सपोर्ट आहे.सर्वोत्तम अनुभवासाठी, आम्ही शिफारस करतो की तुम्ही अद्ययावत ब्राउझर वापरा (किंवा इंटरनेट एक्सप्लोररमध्ये सुसंगतता मोड अक्षम करा).दरम्यान, सतत समर्थन सुनिश्चित करण्यासाठी, आम्ही साइटला शैली आणि JavaScript शिवाय रेंडर करू.
टॉक्सोप्लाझ्मा गोंडी हा एक इंट्रासेल्युलर प्रोटोझोअन परजीवी आहे जो संक्रमित यजमानाच्या सूक्ष्म वातावरणात सुधारणा करतो आणि ब्रेन ट्यूमरच्या वाढीच्या घटनांशी संबंधित असल्याचे ओळखले जाते.या अभ्यासात, आम्ही असे गृहीत धरतो की टोक्सोप्लाझ्मा संसर्गामुळे एक्सोसोमल miRNA-21 ब्रेन ट्यूमरच्या वाढीस प्रोत्साहन देते.टोक्सोप्लाझ्मा-संक्रमित BV2 मायक्रोग्लियाचे एक्सोसोम्स वैशिष्ट्यीकृत केले गेले आणि U87 ग्लिओमा पेशींच्या अंतर्गतीकरणाची पुष्टी झाली.टोक्सोप्लाझ्मा गोंडी आणि ट्यूमर सॉर्टिंगशी संबंधित मायक्रोआरएनए आणि मायक्रोआरएनए-21A-5p च्या अॅरे वापरून एक्सोसोमल मायक्रोआरएनए एक्सप्रेशन प्रोफाइलचे विश्लेषण केले गेले.आम्ही एक्सोसोममधील miR-21 पातळी बदलून U87 ग्लिओमा पेशींमधील ट्यूमर-संबंधित जनुकांच्या mRNA पातळीचा आणि मानवी U87 ग्लिओमा पेशींच्या प्रसारावर एक्सोसोमचा प्रभाव देखील तपासला.Toxoplasma gondii ची लागण झालेल्या U87 ग्लिओमा पेशींच्या exosomes मध्ये, microRNA-21 चे अभिव्यक्ती वाढते आणि antitumor genes (FoxO1, PTEN आणि PDCD4) ची क्रिया कमी होते.टोक्सोप्लाझ्मा संक्रमित BV2-व्युत्पन्न एक्सोसोम्स U87 ग्लिओमा पेशींच्या प्रसारास प्रेरित करतात.एक्सोसोम्स माऊस ट्यूमर मॉडेलमध्ये U87 पेशींच्या वाढीस प्रेरित करतात.आम्ही सुचवितो की टोक्सोप्लाझ्मा-संक्रमित BV2 मायक्रोग्लियामध्ये वाढलेले एक्सोसोमल miR-21 हे अँटीट्यूमर जीन्स कमी करून U87 ग्लिओमा पेशींमध्ये सेल वाढ प्रवर्तक म्हणून महत्त्वपूर्ण भूमिका बजावू शकते.
असा अंदाज आहे की 2018 मध्ये जगभरात प्रगत कर्करोगाच्या 18.1 दशलक्षाहून अधिक प्रकरणांचे निदान झाले होते, सुमारे 297,000 मध्यवर्ती मज्जासंस्थेच्या ट्यूमरचे दरवर्षी निदान होते (सर्व ट्यूमरपैकी 1.6%).मागील संशोधनात असे दिसून आले आहे की मानवी मेंदूतील ट्यूमर विकसित होण्याच्या जोखमीच्या घटकांमध्ये विविध रासायनिक उत्पादने, कौटुंबिक इतिहास आणि डोक्यावरील उपचारात्मक आणि निदान उपकरणांमधून आयनीकरण रेडिएशन यांचा समावेश होतो.तथापि, या घातक रोगांचे नेमके कारण अज्ञात आहे.जगभरातील सर्व कर्करोगांपैकी अंदाजे 20% संसर्गजन्य घटकांमुळे होतात, ज्यात विषाणू, जीवाणू आणि परजीवी यांचा समावेश होतो3,4.संसर्गजन्य रोगजनक यजमान पेशींच्या अनुवांशिक कार्यपद्धतींमध्ये व्यत्यय आणतात, जसे की डीएनए दुरुस्ती आणि पेशी चक्र, आणि यामुळे दीर्घकाळ जळजळ होऊ शकते आणि रोगप्रतिकारक प्रणालीला नुकसान होऊ शकते5.
मानवी कर्करोगाशी संबंधित संसर्गजन्य एजंट हे मानवी पॅपिलोमाव्हायरस आणि हिपॅटायटीस बी आणि सी व्हायरससह सर्वात सामान्य विषाणूजन्य रोगजनक आहेत.मानवी कर्करोगाच्या विकासामध्ये परजीवी देखील संभाव्य भूमिका बजावू शकतात.शिस्टोसोमा, ओपिशोर्चिस व्हिव्हेरिनी, ओ. फेलिनियस, क्लोनोर्चिस सायनेन्सिस आणि हायमेनोलेपिस नाना या अनेक परजीवी प्रजाती 6,7,8 मानवी कर्करोगाच्या विविध प्रकारांमध्ये अडकल्या आहेत.
टोक्सोप्लाझ्मा गोंडी हा इंट्रासेल्युलर प्रोटोझोआन आहे जो संक्रमित यजमान पेशींच्या सूक्ष्म वातावरणाचे नियमन करतो.हा परजीवी जगाच्या अंदाजे 30% लोकसंख्येला संक्रमित करेल असा अंदाज आहे, ज्यामुळे संपूर्ण लोकसंख्येला 9,10 धोका आहे.टोक्सोप्लाझ्मा गोंडी मध्यवर्ती मज्जासंस्थेसह (CNS) महत्वाच्या अवयवांना संक्रमित करू शकते आणि घातक मेंदुज्वर आणि एन्सेफलायटीस सारखे गंभीर आजार होऊ शकते, विशेषत: इम्युनोकॉम्प्रोमाइज्ड रूग्णांमध्ये.तथापि, टॉक्सोप्लाझ्मा गोंडी रोगप्रतिकारक्षम व्यक्तींमध्ये पेशींची वाढ आणि रोगप्रतिकारक प्रतिक्रिया सुधारून संक्रमित यजमानाचे वातावरण देखील बदलू शकते, ज्यामुळे लक्षणे नसलेला क्रॉनिक संसर्ग 9,11 राखला जातो.विशेष म्हणजे, टी. गोंडीचा प्रादुर्भाव आणि मेंदूतील ट्यूमरच्या घटनांमधील परस्परसंबंध लक्षात घेता, काही अहवाल सूचित करतात की व्हिव्हो होस्टमध्ये तीव्र टी. गोंडी संसर्गामुळे होणारे पर्यावरणीय बदल ट्यूमरच्या सूक्ष्म वातावरणासारखे असतात.
एक्सोसोम्स हे इंटरसेल्युलर कम्युनिकेटर म्हणून ओळखले जातात जे शेजारच्या पेशींमधून प्रथिने आणि न्यूक्लिक अॅसिडसह जैविक सामग्री वितरीत करतात16,17.एक्सोसोम्स अर्बुद-संबंधित जैविक प्रक्रियांवर प्रभाव टाकू शकतात जसे की ट्यूमर सूक्ष्म वातावरणातील अँटी-अपोप्टोसिस, अँजिओजेनेसिस आणि मेटास्टॅसिस.विशेषतः, miRNAs (miRNAs), लहान नॉन-कोडिंग RNAs सुमारे 22 न्यूक्लियोटाइड लांबीचे, महत्वाचे पोस्ट-ट्रान्सक्रिप्शनल जीन रेग्युलेटर आहेत जे miRNA-प्रेरित सायलेन्सिंग कॉम्प्लेक्स (miRISC) द्वारे 30% पेक्षा जास्त मानवी mRNA नियंत्रित करतात.टोक्सोप्लाझ्मा गोंडी संक्रमित यजमानांमध्ये miRNA अभिव्यक्ती नियंत्रित करून जैविक प्रक्रियांमध्ये व्यत्यय आणू शकते.यजमान miRNAs मध्ये परजीवी जगण्याची रणनीती साध्य करण्यासाठी यजमान जैविक प्रक्रियांचे नियमन करण्यासाठी महत्त्वाचे संकेत असतात.अशा प्रकारे, T. gondii च्या संसर्गानंतर यजमान miRNA प्रोफाइलमधील बदलांचा अभ्यास केल्याने यजमान आणि T. gondii यांच्यातील परस्परसंवाद अधिक स्पष्टपणे समजून घेण्यास मदत होऊ शकते.खरंच, थिरुग्ननम आणि इतर.15 ने सुचवले की T. gondii ट्यूमरच्या वाढीशी संबंधित विशिष्ट यजमान miRNAs वरील अभिव्यक्ती बदलून मेंदूच्या कार्सिनोजेनेसिसला प्रोत्साहन देते आणि आढळले की T. gondii प्रायोगिक प्राण्यांमध्ये ग्लिओमास होऊ शकते.
हा अभ्यास टॉक्सोप्लाझ्मा BV2 ने संक्रमित यजमान मायक्रोग्लियामध्ये एक्सोसोमल miR-21 च्या बदलावर लक्ष केंद्रित करतो.FoxO1/p27 च्या न्यूक्लियसमध्ये टिकून राहिल्यामुळे U87 ग्लिओमा पेशींच्या वाढीमध्ये बदललेल्या एक्सोसोमल miR-21 ची संभाव्य भूमिका आम्ही पाहिली, जे ओव्हरएक्सप्रेस्ड miR-21 चे लक्ष्य आहे.
BV2 मधून मिळविलेले एक्सोसोम डिफरेंशियल सेंट्रीफ्यूगेशन वापरून प्राप्त केले गेले आणि सेल्युलर घटक किंवा इतर वेसिकल्ससह दूषित होण्यापासून रोखण्यासाठी विविध पद्धतींनी प्रमाणित केले गेले.SDS-polyacrylamide जेल इलेक्ट्रोफोरेसीस (SDS-PAGE) ने BV2 पेशी आणि एक्सोसोम्स (आकृती 1A) मधून काढलेले प्रथिने यांच्यातील वेगळे नमुने दर्शविले आणि अॅलिक्सच्या उपस्थितीसाठी नमुन्यांचे मूल्यांकन केले गेले, ज्याचे विश्लेषण मध्ये एक्सोसोमल प्रोटीन मार्करच्या वेस्टर्न ब्लॉटिंगद्वारे केले गेले.एलिक्स लेबलिंग एक्सोसोम प्रोटीन्समध्ये आढळले परंतु BV2 सेल लाइसेट प्रोटीन्समध्ये नाही (चित्र 1B).याव्यतिरिक्त, बीव्ही 2 मधून मिळवलेल्या एक्सोसोम्सपासून शुद्ध केलेल्या आरएनएचे बायोएनालायझर वापरून विश्लेषण केले गेले.एक्सोसोमल आरएनए माइग्रेशन पॅटर्नमध्ये 18S आणि 28S राइबोसोमल सबयुनिट्स क्वचितच आढळून आले, जे विश्वसनीय शुद्धता (आकृती 1C) दर्शवितात.शेवटी, ट्रान्समिशन इलेक्ट्रॉन मायक्रोस्कोपीने असे दर्शवले की निरीक्षण केलेले एक्सोसोम्स सुमारे 60-150 एनएम आकाराचे होते आणि त्यांची एक कपासारखी रचना होती जी एक्सोसोम मॉर्फोलॉजी (चित्र 1D) असते.
BV2 पेशींमधून मिळणाऱ्या एक्सोसोम्सचे वैशिष्ट्य.(अ) सुरक्षा डेटा शीट पृष्ठ.प्रथिने BV2 पेशींपासून किंवा BV2 मधून मिळवलेल्या एक्सोसोम्सपासून विलग करण्यात आली होती.पेशी आणि एक्सोसोम्समध्ये प्रथिनांचे नमुने वेगळे असतात.(ब) एक्सोसोमल मार्कर (अॅलिक्स) चे वेस्टर्न ब्लॉट विश्लेषण.(C) बायोएनालायझर वापरून BV2 पेशी आणि BV2 व्युत्पन्न एक्सोसोम्समधून शुद्ध केलेल्या RNA चे मूल्यमापन.अशा प्रकारे, BV2 पेशींमधील 18S आणि 28S राइबोसोमल सबयुनिट्स एक्सोसोमल आरएनएमध्ये क्वचितच आढळले.(डी) ट्रान्समिशन इलेक्ट्रॉन मायक्रोस्कोपीने दर्शविले की BV2 पेशींपासून वेगळे केलेले एक्सोसोम 2% युरेनिल एसीटेटने नकारात्मकरित्या डागलेले होते.एक्सोसोम्स अंदाजे 60-150 एनएम आकाराचे आणि कप-आकाराचे असतात (गाणे आणि जंग, अप्रकाशित डेटा).
कॉन्फोकल मायक्रोस्कोपी वापरून U87 मानवी ग्लिओमा पेशींमध्ये BV2-व्युत्पन्न एक्सोसोमचे सेल्युलर इंटरनलायझेशन दिसून आले.PKH26 लेबल केलेले एक्सोसोम्स U87 पेशींच्या सायटोप्लाझममध्ये स्थानिकीकृत आहेत.केंद्रके DAPI (Fig. 2A) ने डागलेले होते, हे दर्शविते की BV2-व्युत्पन्न एक्सोसोम्स होस्ट पेशींद्वारे आंतरिक केले जाऊ शकतात आणि प्राप्तकर्त्या पेशींच्या वातावरणावर प्रभाव टाकू शकतात.
BV2-व्युत्पन्न एक्सोसोम्सचे U87 ग्लिओमा पेशींमध्ये अंतर्गतीकरण आणि BV2-व्युत्पन्न एक्सोसोम्सचे टोक्सोप्लाझ्मा RH द्वारे संक्रमित U87 ग्लिओमा पेशींचा प्रसार.(A) कॉन्फोकल मायक्रोस्कोपीद्वारे मोजलेल्या U87 पेशींनी वेढलेले एक्सोसोम.U87 ग्लिओमा पेशी PKH26 (लाल) लेबल केलेल्या एक्सोसोम्ससह किंवा 24 तास नियंत्रणाशिवाय उष्मायन केल्या गेल्या.केंद्रक DAPI (निळा) सह डागलेले होते आणि नंतर कॉन्फोकल सूक्ष्मदर्शकाखाली (स्केल बार: 10 μm, x 3000) निरीक्षण केले होते.(B) U87 ग्लिओमा सेल प्रसार सेल प्रसार परख द्वारे निर्धारित केले गेले.U87 ग्लिओमा पेशींवर सूचित वेळेसाठी एक्सोसोमसह उपचार केले गेले. *P <0.05 विद्यार्थ्यांच्या टी चाचणीद्वारे प्राप्त झाले. *P <0.05 विद्यार्थ्यांच्या टी चाचणीद्वारे प्राप्त झाले. *पी < 0,05 получено по t-критерию Стьюдента. *विद्यार्थ्याच्या टी-चाचणीद्वारे पी <0.05. *पी < 0.05 通过学生t 检验获得. *पी < ०.०५ * P < 0,05, полученный с помощью t-критерия Стьюдента. * P < 0.05 विद्यार्थ्याच्या टी-चाचणीचा वापर करून प्राप्त केले.
U87 ग्लिओमा पेशींमध्ये BV2-व्युत्पन्न एक्सोसोम्सच्या अंतर्गतीकरणाची पुष्टी केल्यानंतर, आम्ही मानवी ग्लिओमा पेशींच्या विकासामध्ये BV2-व्युत्पन्न टॉक्सोप्लाझ्मा-व्युत्पन्न एक्सोसोम्सच्या भूमिकेची तपासणी करण्यासाठी सेल प्रसार परीक्षण केले.T. gondii-संक्रमित BV2 पेशींच्या एक्सोसोमसह U87 पेशींवर उपचार केल्याने असे दिसून आले की T. gondii-संक्रमित BV2-व्युत्पन्न एक्सोसोम्समुळे नियंत्रणाच्या तुलनेत U87 पेशींचा मोठ्या प्रमाणात प्रसार झाला (चित्र 2B).
याव्यतिरिक्त, U118 पेशींच्या वाढीचे परिणाम U87 सारखेच होते, कारण टॉक्सोप्लाझ्मा उत्तेजित एक्सोसोम्समुळे उच्च पातळीचा प्रसार झाला (डेटा दर्शविला नाही).या डेटाच्या आधारे, आम्ही सूचित करू शकतो की BV2-व्युत्पन्न टॉक्सोप्लाझ्मा-संक्रमित एक्सोसोम्स ग्लिओमा पेशींच्या प्रसारामध्ये महत्त्वाची भूमिका बजावतात.
ट्यूमरच्या विकासावर टॉक्सोप्लाझ्मा-संक्रमित BV2-व्युत्पन्न एक्सोसोम्सचा परिणाम तपासण्यासाठी, आम्ही Xenograft मॉडेलसाठी U87 ग्लिओमा पेशी नग्न उंदरांमध्ये इंजेक्ट केले आणि BV2-व्युत्पन्न एक्सोसोम्स किंवा RH-संक्रमित BV2-व्युत्पन्न एक्सोसोम्स इंजेक्ट केले.1 आठवड्यानंतर ट्यूमर स्पष्ट झाल्यानंतर, समान प्रारंभिक बिंदू निर्धारित करण्यासाठी 5 उंदरांच्या प्रत्येक प्रायोगिक गटाला ट्यूमरच्या आकारानुसार विभागले गेले आणि ट्यूमरचा आकार 22 दिवसांसाठी मोजला गेला.
U87 xenograft मॉडेल असलेल्या उंदरांमध्ये, BV2-व्युत्पन्न RH-संक्रमित एक्सोसोम गटामध्ये 22 व्या दिवशी (चित्र 3A,B) लक्षणीयरीत्या मोठ्या ट्यूमरचा आकार आणि वजन दिसून आले.दुसरीकडे, BV2-व्युत्पन्न एक्सोसोम ग्रुप आणि एक्सोसोम उपचारानंतर कंट्रोल ग्रुपमध्ये ट्यूमरच्या आकारात कोणताही महत्त्वपूर्ण फरक नव्हता.याव्यतिरिक्त, ग्लिओमा पेशी आणि एक्सोसोम्ससह इंजेक्ट केलेल्या उंदरांनी RH-संक्रमित BV2-व्युत्पन्न एक्सोसोम्स (Fig. 3C) गटातील सर्वात मोठ्या ट्यूमरचे प्रमाण दृश्यमानपणे प्रदर्शित केले.हे परिणाम दर्शवतात की BV2-व्युत्पन्न टॉक्सोप्लाझ्मा-संक्रमित एक्सोसोम्स माउस ट्यूमर मॉडेलमध्ये ग्लिओमा वाढीस प्रेरित करतात.
U87 xenograft माउस मॉडेलमध्ये BV2-व्युत्पन्न एक्सोसोमचे ऑन्कोजेनेसिस (AC).ट्यूमरचा आकार (A) आणि वजन (B) लक्षणीयरीत्या वाढले होते BALB/c नग्न उंदरांमध्ये BV2 पासून प्राप्त झालेल्या RH-संक्रमित एक्सोसोमसह उपचार केले गेले.BALB/c नग्न उंदीर (C) यांना मॅट्रिजेल मिश्रणात निलंबित केलेल्या 1 x 107 U87 पेशींसह त्वचेखालील इंजेक्शन दिले गेले.इंजेक्शननंतर सहा दिवसांनी, 100 μg BV2-व्युत्पन्न एक्सोसोम्सचा उंदरांमध्ये उपचार करण्यात आला.ट्यूमरचा आकार आणि वजन अनुक्रमे सूचित दिवसांवर आणि त्यागानंतर मोजले गेले. *पी < ०.०५. *पी < ०.०५. *R < ०,०५. *पी < ०.०५. *पी <0.05. *पी <0.05. *R < ०,०५. *पी < ०.०५.
डेटाने दर्शविले की 37 miRNAs (16 overexpressed आणि 21 downexpressed) रोग प्रतिकारशक्ती किंवा ट्यूमरच्या विकासाशी निगडीत, Toxoplasma RH स्ट्रेन (Fig. 4A) च्या संसर्गानंतर मायक्रोग्लियामध्ये लक्षणीयरीत्या बदलले गेले.बदललेल्या miRNAs मधील miR-21 च्या सापेक्ष अभिव्यक्ती पातळीची पुष्टी BV2 मधून काढलेल्या एक्सोसोम्स, BV2 आणि U87 पेशींद्वारे उपचार केलेल्या एक्सोसोम्समध्ये रिअल-टाइम RT-PCR द्वारे केली गेली.miR-21 च्या अभिव्यक्तीने टोक्सोप्लाझ्मा गोंडी (RH स्ट्रेन) (Fig. 4B) ने संक्रमित BV2 पेशींमधून एक्सोसोममध्ये लक्षणीय वाढ दर्शविली.BV2 आणि U87 पेशींमध्ये miR-21 ची सापेक्ष अभिव्यक्ती पातळी बदललेल्या एक्सोसोम्स (Fig. 4B) घेतल्यानंतर वाढली.ट्यूमर रूग्णांच्या मेंदूच्या ऊतींमधील miR-21 अभिव्यक्तीची सापेक्ष पातळी आणि टॉक्सोप्लाझ्मा गोंडी (ME49 स्ट्रेन) ची लागण झालेल्या उंदरांमध्ये अनुक्रमे नियंत्रणापेक्षा जास्त होते (चित्र 4C).हे परिणाम विट्रो आणि व्हिव्होमधील अंदाज आणि पुष्टी केलेल्या मायक्रोआरएनएच्या अभिव्यक्ती पातळींमधील फरकांशी संबंधित आहेत.
टोक्सोप्लाझ्मा गोंडी (RH) ने संक्रमित मायक्रोग्लियामध्ये एक्सोसोमल miP-21a-5p च्या अभिव्यक्तीमध्ये बदल.(A) T. gondii RH संसर्गानंतर रोग प्रतिकारशक्ती किंवा ट्यूमरच्या विकासाशी संबंधित siRNA मध्ये लक्षणीय बदल दर्शविते.(B) रिअल-टाइम RT-PCR द्वारे BV2-व्युत्पन्न एक्सोसोम्स, BV2-उपचारित एक्सोसोम्स आणि U87 पेशींमध्ये सापेक्ष miR-21 अभिव्यक्ती पातळी शोधण्यात आली.(C) ट्यूमर रुग्ण (N=3) आणि टॉक्सोप्लाझ्मा गोंडी (ME49 स्ट्रेन) (N=3) ने संक्रमित उंदरांच्या मेंदूच्या ऊतींमध्ये सापेक्ष miR-21 अभिव्यक्ती पातळी आढळून आली. *P <0.05 विद्यार्थ्यांच्या टी चाचणीद्वारे प्राप्त झाले. *P <0.05 विद्यार्थ्यांच्या टी चाचणीद्वारे प्राप्त झाले. *पी < 0,05 было получено с помощью t-критерия Стьюдента. *P <0.05 विद्यार्थ्याच्या टी-चाचणीचा वापर करून प्राप्त झाले. *पी < 0.05 通过学生t 检验获得. *पी < ०.०५ * पी <0,05, полученный с помощью t-критерия Стьюдента. * P < 0.05 विद्यार्थ्याच्या टी-चाचणीचा वापर करून प्राप्त केले.
RH-संक्रमित BV2 पेशींतील एक्सोसोम्समुळे विवो आणि इन विट्रो (चित्र 2, 3) मध्ये ग्लिओमाची वाढ झाली.संबंधित mRNAs शोधण्यासाठी, आम्ही BV2 किंवा RH BV2 पासून व्युत्पन्न केलेल्या एक्सोसोम्सने संक्रमित U87 पेशींमध्ये अँटीट्यूमर लक्ष्य जनुकांचे mRNA स्तर, फोर्कहेड बॉक्स O1 (FoxO1), PTEN आणि प्रोग्राम केलेले सेल डेथ 4 (PDCD4) तपासले.बायोइन्फॉरमॅटिक्स विश्लेषणाने दर्शविले आहे की फॉक्सओ1, पीटीईएन आणि पीडीसीडी 4 जनुकांसह अनेक ट्यूमर-संबंधित जनुकांमध्ये miR-2121,22 बंधनकारक साइट्स आहेत.RH-संक्रमित BV2-व्युत्पन्न एक्सोसोम्समध्ये BV2-व्युत्पन्न एक्सोसोम्स (Fig. 5A) च्या तुलनेत अँटीट्यूमर लक्ष्य जनुकांची mRNA पातळी कमी झाली.FoxO1 ने BV2-व्युत्पन्न एक्सोसोम्स (आकृती 5B) च्या तुलनेत RH-संक्रमित BV2-व्युत्पन्न एक्सोसोममध्ये कमी प्रथिने पातळी दर्शविली.या परिणामांच्या आधारे, आम्ही याची पुष्टी करू शकतो की RH-संक्रमित BV2 मधून मिळविलेले एक्सोसोम्स अँटी-ऑनकोजेनिक जनुकांचे नियमन करतात, ट्यूमरच्या वाढीमध्ये त्यांची भूमिका कायम ठेवतात.
टोक्सोप्लाझ्मा RH-संक्रमित BV2-व्युत्पन्न एक्सोसोम्स टॉक्सोप्लाझ्मा RH-संक्रमित BV2-व्युत्पन्न एक्सोसोम्सद्वारे U87 ग्लिओमा पेशींमध्ये अँटीट्यूमर जनुकांचे दडपण आणतात.(A) PBS एक्सोसोम्सच्या तुलनेत T. gondii RH-infected BV2 मधून काढलेल्या एक्सोसोममध्ये फॉक्सओ1, पीटीईएन आणि पीडीसीडी 4 एक्स्प्रेशनचा रिअल-टाइम पीसीआर.β-actin mRNA एक नियंत्रण म्हणून वापरले होते.(बी) फॉक्सओ 1 अभिव्यक्ती वेस्टर्न ब्लॉटिंगद्वारे निर्धारित केली गेली आणि इमेजजे प्रोग्राम वापरून डेन्सिटोमेट्री डेटाचे सांख्यिकीय मूल्यमापन केले गेले. *P <0.05 विद्यार्थ्यांच्या टी चाचणीद्वारे प्राप्त झाले. *P <0.05 विद्यार्थ्यांच्या टी चाचणीद्वारे प्राप्त झाले. *पी < 0,05 было получено с помощью t-критерия Стьюдента. *P <0.05 विद्यार्थ्याच्या टी-चाचणीचा वापर करून प्राप्त झाले. *पी < 0.05 通过学生t 检验获得. *पी < ०.०५ * पी <0,05, полученный с помощью t-критерия Стьюдента. * P < 0.05 विद्यार्थ्याच्या टी-चाचणीचा वापर करून प्राप्त केले.
ट्यूमर-संबंधित जनुक नियमनावर एक्सोसोम्समधील miP-21 चा प्रभाव समजून घेण्यासाठी, U87 पेशींना MiP-21 च्या अवरोधकाने Lipofectamine 2000 वापरून संक्रमण केले गेले आणि पेशींची कापणी 24 तासांनंतर केली गेली.एमआयआर-21 इनहिबिटरसह संक्रमण झालेल्या पेशींमध्ये फॉक्सओ1 आणि p27 अभिव्यक्ती पातळीची तुलना qRT-PCR (चित्र 6A,B) वापरून BV2-व्युत्पन्न एक्सोसोमसह उपचार केलेल्या पेशींशी केली गेली.U87 पेशींमध्ये miR-21 इनहिबिटरचे संक्रमण FoxO1 आणि p27 अभिव्यक्ती (FIG. 6) मध्ये लक्षणीयरीत्या कमी करते.
RH-संक्रमित एक्सोसोमल BV2-व्युत्पन्न miP-21 ने U87 ग्लिओमा पेशींमध्ये FoxO1/p27 अभिव्यक्ती बदलली.Lipofectamine 2000 चा वापर करून U87 पेशी miP-21 इनहिबिटरने संक्रमित करण्यात आल्या आणि रक्तसंक्रमणानंतर 24 तासांनी पेशींची कापणी करण्यात आली.एमआयआर-21 इनहिबिटरसह संक्रमण झालेल्या पेशींमधील फॉक्सओ1 आणि पी27 अभिव्यक्ती पातळीची तुलना क्यूआरटी-पीसीआर (ए, बी) वापरून BV2-व्युत्पन्न एक्सोसोमसह उपचार केलेल्या पेशींमधील पातळीशी केली गेली.
यजमानाच्या रोगप्रतिकारक प्रतिसादापासून वाचण्यासाठी, टॉक्सोप्लाझ्मा परजीवी टिश्यू सिस्टमध्ये रूपांतरित होते.ते यजमानाच्या संपूर्ण आयुष्यात मेंदू, हृदय आणि कंकाल स्नायूंसह विविध ऊतींचे परजीवी करतात आणि यजमानाच्या रोगप्रतिकारक प्रतिसादात सुधारणा करतात.याव्यतिरिक्त, ते पेशी चक्र आणि यजमान पेशींच्या ऍपोप्टोसिसचे नियमन करू शकतात, त्यांच्या प्रसारास प्रोत्साहन देतात 14,24.टॉक्सोप्लाझ्मा गोंडी प्रामुख्याने मेंदूच्या मायक्रोग्लियासह यजमान डेंड्रिटिक पेशी, न्यूट्रोफिल्स आणि मोनोसाइट/मॅक्रोफेज वंशाला संक्रमित करते.टोक्सोप्लाझ्मा गोंडी M2 फिनोटाइपच्या मॅक्रोफेजचे वेगळेपण प्रेरित करते, रोगजनकांच्या संसर्गानंतर जखमेच्या उपचारांवर परिणाम करते आणि हायपरव्हॅस्क्युलरायझेशन आणि ग्रॅन्युलोमॅटस फायब्रोसिसशी देखील संबंधित आहे.टोक्सोप्लाझ्मा संसर्गाचे हे वर्तनात्मक रोगजनन ट्यूमरच्या विकासाशी संबंधित मार्करशी संबंधित असू शकते.टोक्सोप्लाझ्माद्वारे नियंत्रित केलेले प्रतिकूल वातावरण संबंधित पूर्वकॅन्सरसारखे असू शकते.म्हणून, असे गृहीत धरले जाऊ शकते की टोक्सोप्लाझ्मा संसर्गाने मेंदूच्या ट्यूमरच्या विकासास हातभार लावला पाहिजे.खरं तर, विविध ब्रेन ट्यूमर असलेल्या रुग्णांच्या सीरममध्ये टोक्सोप्लाझ्मा संसर्गाचे उच्च दर नोंदवले गेले आहेत.याव्यतिरिक्त, टॉक्सोप्लाझ्मा गोंडी हे आणखी एक कार्सिनोजेनिक प्रभावक असू शकते आणि इतर संसर्गजन्य कार्सिनोजेन्सना मेंदूतील ट्यूमर विकसित करण्यात मदत करण्यासाठी सहकार्याने कार्य करते.या संदर्भात, हे लक्षात घेण्यासारखे आहे की पी. फाल्सीपेरम आणि एपस्टाईन-बॅर विषाणू सहक्रियात्मकपणे बुर्किटच्या लिम्फोमाच्या निर्मितीमध्ये योगदान देतात.
कर्करोग संशोधनाच्या क्षेत्रात नियामक म्हणून एक्सोसोम्सची भूमिका विस्तृतपणे तपासली गेली आहे.तथापि, परजीवी आणि संक्रमित यजमान यांच्यातील एक्सोसोमची भूमिका फारशी समजलेली नाही.आतापर्यंत, स्रावित प्रथिनांसह विविध नियामकांनी जैविक प्रक्रियांचे स्पष्टीकरण दिले आहे ज्याद्वारे प्रोटोझोआ परजीवी यजमानांच्या हल्ल्याचा प्रतिकार करतात आणि संसर्ग कायम ठेवतात.अलीकडे, प्रोटोझोआ-संबंधित मायक्रोवेसिकल्स आणि त्यांचे मायक्रोआरएनए त्यांच्या अस्तित्वासाठी अनुकूल वातावरण तयार करण्यासाठी यजमान पेशींशी संवाद साधतात अशी एक वाढणारी संकल्पना आहे.म्हणून, बदललेले एक्सोसोमल एमआयआरएनए आणि ग्लिओमा सेल प्रसार यांच्यातील संबंध शोधण्यासाठी पुढील अभ्यास आवश्यक आहेत.मायक्रोआरएनए फेरबदल (क्लस्टर जीन्स miR-30c-1, miR-125b-2, miR-23b-27b-24-1 आणि miR-17-92) टोक्सोप्लाझ्मा-संक्रमित मानवी मॅक्रोफेजमध्ये STAT3 प्रवर्तकाला बांधतात, नियंत्रित केले जातात आणि अँटी प्रेरित करतात. -टोक्सोप्लाझ्मा गोंडी संसर्गाच्या प्रतिसादात ऍपोप्टोसिस 29.टॉक्सोप्लाझ्मा संसर्गामुळे miR-17-5p आणि miR-106b-5p ची अभिव्यक्ती वाढते, जे अनेक हायपरप्रोलिफेरेटिव्ह रोगांशी संबंधित आहेत 30.हे डेटा सूचित करतात की टॉक्सोप्लाझ्मा संसर्गाद्वारे नियंत्रित केलेले यजमान miRNAs हे यजमान जैविक वर्तनातील परजीवी जगण्यासाठी आणि पॅथोजेनेसिससाठी महत्वाचे रेणू आहेत.
बदललेले miRNAs ग्लिओमाससह घातक पेशींच्या आरंभ आणि प्रगती दरम्यान विविध प्रकारच्या वर्तनावर प्रभाव टाकू शकतात: वाढ सिग्नलची स्वयंपूर्णता, वाढ-प्रतिबंधक सिग्नल्सची असंवेदनशीलता, अपोप्टोसिस चोरी, अमर्यादित प्रतिकृती क्षमता, एंजियोजेनेसिस, आक्रमण आणि मेटास्टॅसिस आणि इन्फ्लेम.ग्लिओमामध्ये, बदललेले miRNA अनेक अभिव्यक्ती प्रोफाइलिंग अभ्यासांमध्ये ओळखले गेले आहेत.
सध्याच्या अभ्यासात, आम्ही टोक्सोप्लाझ्मा-संक्रमित यजमान पेशींमध्ये miRNA-21 अभिव्यक्तीच्या उच्च पातळीची पुष्टी केली.miR-21 ची ओळख ग्लिओमास, 33 यासह घन ट्यूमरमधील सर्वात वारंवार जास्त प्रमाणात व्यक्त होणारे मायक्रोआरएनए म्हणून करण्यात आली आहे आणि त्याची अभिव्यक्ती ग्लिओमाच्या श्रेणीशी संबंधित आहे.जमा केलेले पुरावे असे सूचित करतात की miR-21 हे एक कादंबरी ऑन्कोजीन आहे जे ग्लिओमाच्या वाढीमध्ये अँटी-अपोप्टोटिक घटक म्हणून कार्य करते आणि मानवी मेंदूच्या अपायकारकतेच्या ऊती आणि प्लाझ्मामध्ये जास्त प्रमाणात व्यक्त केले जाते.विशेष म्हणजे, ग्लिओमा पेशी आणि ऊतींमधील miR-21 निष्क्रियता कॅस्पेस-आश्रित ऍपोप्टोसिसमुळे पेशींच्या प्रसारास प्रतिबंध करते.miR-21 अंदाजित लक्ष्यांच्या जैव सूचनात्मक विश्लेषणाने एपोप्टोसिस मार्गांशी संबंधित अनेक ट्यूमर सप्रेसर जीन्स उघड केले, ज्यात प्रोग्रॅम्ड सेल डेथ 4 (PDCD4), ट्रोपोमायोसिन (TPM1), PTEN, आणि फोर्कहेड बॉक्स O1 (FoxO1), miR-2121 बंधनकारक साइटसह..22.38.
फॉक्सओ१, ट्रान्सक्रिप्शन घटकांपैकी एक (फॉक्सओ), मानवी कर्करोगाच्या विविध प्रकारांच्या विकासामध्ये गुंतलेला आहे आणि p21, p27, Bim आणि FasL40 सारख्या ट्यूमर सप्रेसर जनुकांच्या अभिव्यक्तीचे नियमन करू शकतो.FoxO1 सेल वाढ रोखण्यासाठी p27 सारख्या सेल सायकल इनहिबिटरला बांधून आणि सक्रिय करू शकते.शिवाय, FoxO1 हे PI3K/Akt सिग्नलिंगचे मुख्य प्रभावक आहे आणि p2742 ट्रान्सक्रिप्शनच्या सक्रियतेद्वारे सेल सायकल प्रगती आणि सेल भिन्नता यासारख्या अनेक जैविक प्रक्रियांचे नियमन करते.
शेवटी, आमचा असा विश्वास आहे की टॉक्सोप्लाझ्मा-संक्रमित मायक्रोग्लियापासून मिळविलेले एक्सोसोमल miR-21 ग्लिओमा पेशींच्या वाढीचे नियामक म्हणून महत्त्वपूर्ण भूमिका बजावू शकतात (चित्र 7).तथापि, एक्सोसोमल miR-21, बदललेले टॉक्सोप्लाझ्मा संसर्ग आणि ग्लिओमा वाढ यांच्यातील थेट संबंध शोधण्यासाठी पुढील अभ्यासांची आवश्यकता आहे.हे परिणाम टॉक्सोप्लाझ्मा संसर्ग आणि ग्लिओमाच्या घटना यांच्यातील संबंधांचा अभ्यास करण्यासाठी प्रारंभिक बिंदू प्रदान करतील अशी अपेक्षा आहे.
या अभ्यासात ग्लिओमा (मेंदू) कार्सिनोजेनेसिसच्या यंत्रणेचा एक योजनाबद्ध आकृती प्रस्तावित आहे.लेखक PowerPoint 2019 (Microsoft, Redmond, WA) मध्ये काढतो.
या अभ्यासातील सर्व प्रायोगिक प्रोटोकॉल, प्राण्यांच्या वापरासह, सोल नॅशनल युनिव्हर्सिटी अॅनिमल केअर आणि वापरकर्ता समिती मानक नैतिक मार्गदर्शक तत्त्वांनुसार होते आणि सोल नॅशनल युनिव्हर्सिटी स्कूल ऑफ मेडिसिन (IRB क्रमांक SNU-) च्या संस्थात्मक पुनरावलोकन मंडळाने मंजूर केले होते. १५०७१५).-2).सर्व प्रायोगिक प्रक्रिया ARRIVE शिफारशींनुसार केल्या गेल्या.
BV2 माऊस मायक्रोग्लिया आणि U87 मानवी ग्लिओमा पेशी डल्बेकोच्या मॉडिफाइड ईगल्स मीडियम (DMEM; वेलगेन, सोल, कोरिया) आणि रॉसवेल पार्क मेमोरियल इन्स्टिट्यूटच्या माध्यमात (RPMI; वेलगेन), अनुक्रमे 10% भ्रूण बोवाइन सीरम, एमएल-4 मिडियममध्ये संवर्धित होते. ग्लूटामाइन, 0.2 मिमी पेनिसिलिन आणि 0.05 मिमी स्ट्रेप्टोमायसिन.37 डिग्री सेल्सिअस तापमानात 5% CO2 असलेल्या इनक्यूबेटरमध्ये पेशींचे संवर्धन होते.दुसरी ग्लिओमा सेल लाइन, U118, U87 पेशींच्या तुलनेत वापरली गेली.
T. gondii-संक्रमित RH आणि ME49 स्ट्रेनमधून एक्सोसोम वेगळे करण्यासाठी, 3-4 दिवस आधी इंजेक्शनने 6 आठवड्यांच्या BALB/c उंदरांच्या उदरपोकळीतून T. gondii tachyzoites (RH स्ट्रेन) काढण्यात आले.Tachyzoites PBS सह तीन वेळा धुतले गेले आणि 40% Percoll (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA) 43 मध्ये सेंट्रीफ्यूगेशनद्वारे शुद्ध केले गेले.ME49 स्ट्रेनचे टॅकीझॉइट्स मिळविण्यासाठी, BALB/c उंदरांना इंट्रापेरिटोनली 20 टिश्यू सिस्ट्सद्वारे इंजेक्शन देण्यात आले आणि संक्रमणानंतर (PI) 6-8 व्या दिवशी उदर पोकळी धुवून सिस्ट्समधील टॅकीझॉईट ट्रान्सफॉर्मेशन गोळा केले गेले.पीबीएसने संक्रमित उंदीर.ME49 tachyzoites 100 μg/ml पेनिसिलिन (Gibco/BRL, Grand Island, NY, USA), 100 μg/ml स्ट्रेप्टोमायसिन (Gibco/BRL), आणि 5% गर्भाच्या बोवाइन सीरम (लोन्झा, वॉकर्सविले, MD) सह पूरक पेशींमध्ये वाढले होते. .., USA) 37 °C आणि 5% कार्बन डायऑक्साइड वर.वेरो पेशींमध्ये लागवडीनंतर, ME49 टॅकीझॉइट्स दोनदा 25 गेज सुईद्वारे आणि नंतर 5 µm फिल्टरद्वारे मोडतोड आणि पेशी काढून टाकण्यात आले.धुतल्यानंतर, टॅकीझोइट्स PBS44 मध्ये पुन्हा निलंबित केले गेले.टोक्सोप्लाझ्मा गोंडी स्ट्रेन ME49 चे टिश्यू सिस्ट्स संक्रमित C57BL/6 उंदीर (ओरिएंट बायो अॅनिमल सेंटर, सेओंगनाम, कोरिया) च्या मेंदूपासून वेगळे केलेल्या सिस्टच्या इंट्रापेरिटोनियल इंजेक्शनद्वारे राखले गेले.ME49-संक्रमित उंदरांचे मेंदू PI च्या 3 महिन्यांनंतर काढले गेले आणि सिस्ट वेगळे करण्यासाठी सूक्ष्मदर्शकाखाली बारीक केले गेले.संक्रमित उंदरांना सेऊल नॅशनल युनिव्हर्सिटी स्कूल ऑफ मेडिसिनमध्ये विशेष रोगजनक-मुक्त परिस्थितीत (SPF) ठेवण्यात आले होते.
निर्मात्याच्या सूचनेनुसार miRNeasy Mini Kit (Qiagen, Hilden, Germany) चा वापर करून BV2-व्युत्पन्न एक्सोसोम्स, BV2 पेशी आणि ऊतींमधून एकूण RNA काढण्यात आला, ज्यात उत्सर्जनाच्या टप्प्यासाठी उष्मायन वेळ समाविष्ट आहे.RNA एकाग्रता नॅनोड्रॉप 2000 स्पेक्ट्रोफोटोमीटरवर निर्धारित केली गेली.Agilent 2100 bioanalyzer (Agilent Technologies, Amstelveen, the Netherlands) वापरून आरएनए मायक्रोएरेच्या गुणवत्तेचे मूल्यांकन केले गेले.
10% एक्सोसोम-गरीब FBS सह DMEM 100,000g वर 4°C तापमानावर 16 तासांसाठी अल्ट्रासेंट्रीफ्यूगेशनद्वारे तयार केले गेले आणि 0.22 µm फिल्टरद्वारे फिल्टर केले गेले (Nalgene, Rochester, NY, USA).BV2 पेशी, 5 × 105, DMEM मध्ये 10% exosome-depleted FBS आणि 1% प्रतिजैविक 37°C आणि 5% CO2 असलेले संवर्धन केले गेले.उष्मायनाच्या 24 तासांनंतर, स्ट्रेन RH किंवा ME49 (MOI = 10) चे tachyzoites पेशींमध्ये जोडले गेले आणि नॉन-आक्रमक परजीवी एका तासाच्या आत काढून टाकले गेले आणि DMEM सह पुन्हा भरले गेले.BV2 पेशींमधील एक्सोसोम्स सुधारित डिफरेंशियल सेंट्रीफ्यूगेशनद्वारे वेगळे केले गेले, ही सर्वात मोठ्या प्रमाणावर वापरली जाणारी पद्धत आहे.RNA किंवा प्रथिन विश्लेषणासाठी एक्सोसोम पेलेट 300 μl PBS मध्ये पुन्हा लावा.बीसीए प्रोटीन परख किट (पियर्स, रॉकफोर्ड, आयएल, यूएसए) आणि नॅनोड्रॉप 2000 स्पेक्ट्रोफोटोमीटर वापरून पृथक एक्सोसोम्सची एकाग्रता निश्चित केली गेली.
BV2 पेशी किंवा BV2 मधून मिळविलेले एक्सोसोम्स PRO-PREP™ प्रोटीन एक्स्ट्रॅक्शन सोल्युशन (iNtRon बायोटेक्नॉलॉजी, Seongnam, कोरिया) मध्ये टाकण्यात आले आणि प्रथिने Coomassie brilliant blue stained 10% SDS polyacrylamide gels वर लोड करण्यात आली.याव्यतिरिक्त, प्रथिने 2 तासांसाठी पीव्हीडीएफ झिल्लीमध्ये हस्तांतरित केली गेली.एलिक्स अँटीबॉडी (सेल सिग्नलिंग टेक्नॉलॉजी, बेव्हरली, एमए, यूएसए) एक एक्सोसोमल मार्कर म्हणून वेस्टर्न ब्लॉट्सचे प्रमाणीकरण केले गेले.HRP-संयुग्मित शेळी अँटी-माउस IgG (H + L) (बेथिल लॅबोरेटरीज, माँटगोमेरी, TX, USA) आणि LAS-1000 प्लस ल्युमिनेसेंट इमेज विश्लेषक (फुजी फोटोग्राफिक फिल्म, टोकियो, जपान) दुय्यम प्रतिपिंड म्हणून वापरले गेले..एक्सोसोम्सचा आकार आणि आकारविज्ञान अभ्यासण्यासाठी ट्रान्समिशन इलेक्ट्रॉन मायक्रोस्कोपी केली गेली.BV2 पेशी (6.40 µg/µl) पासून वेगळे केलेले एक्सोसोम कार्बन-लेपित जाळीवर तयार केले गेले आणि 1 मिनिटासाठी 2% युरेनिल एसीटेटने नकारात्मक डाग केले गेले.तयार केलेले नमुने ES1000W Erlangshen CCD कॅमेरा (Gatan, Pleasanton, CA, USA) ने सुसज्ज असलेल्या JEOL 1200-EX II (टोक्यो, जपान) वापरून 80 kV च्या प्रवेगक व्होल्टेजवर आढळून आले.
PKH26 रेड फ्लोरोसेंट लिंकर किट (सिग्मा-अल्ड्रिच, सेंट लुईस, MO, USA) वापरून BV2-व्युत्पन्न एक्सोसोम खोलीच्या तपमानावर 15 मिनिटांसाठी डागले गेले.U87 पेशी, 2×105, PKH26-लेबल केलेले एक्सोसोम (लाल) किंवा नकारात्मक नियंत्रण म्हणून कोणतेही एक्सोसोम नाहीत, 5% CO2 इनक्यूबेटरमध्ये 24 तासांसाठी 37°C तापमानात उष्मायन केले गेले.U87 सेल न्यूक्ली DAPI (निळ्या) ने डागले होते, U87 पेशी 4% पॅराफॉर्मल्डिहाइडमध्ये 15 मिनिटांसाठी 4°C वर निश्चित केल्या गेल्या आणि नंतर Leica TCS SP8 STED CW कॉन्फोकल मायक्रोस्कोप सिस्टम (Leica Microsystems, Mannheim, Germany) मध्ये विश्लेषण केले गेले.निरीक्षण करण्यायोग्य
Mir-X siRNA फर्स्ट स्ट्रँड सिंथेसिस आणि SYBR qRT-PCR किट (Takara Bio Inc., Shiga, Japan) वापरून siRNA मधून cDNA संश्लेषित केले गेले.रिअल टाइम क्वांटिटेटिव्ह पीसीआर आयक्यू 5 रिअल टाइम पीसीआर डिटेक्शन सिस्टम (बायो-रॅड, हरक्यूलिस, सीए, यूएसए) वापरून प्राइमर्स आणि टेम्प्लेट्स SYBR प्रिमिक्ससह मिश्रित वापरून केले गेले.डीएनए विकृतीकरणाच्या 40 चक्रांसाठी 15 s साठी 95°C वर आणि 60 s साठी 60°C वर ऍनिलिंग करण्यात आले.प्रत्येक पीसीआर प्रतिक्रियेतील डेटाचे विश्लेषण iQ™5 ऑप्टिकल सिस्टम सॉफ्टवेअर (Bio-Rad) च्या डेटा विश्लेषण मॉड्यूल वापरून केले गेले.निवडलेल्या लक्ष्य जीन्स आणि β-actin/siRNA (आणि U6) मधील जनुक अभिव्यक्तीमधील सापेक्ष बदल मानक वक्र पद्धती वापरून मोजले गेले.वापरलेले प्राइमर अनुक्रम तक्ता 1 मध्ये दर्शविले आहेत.
3 x 104 U87 ग्लिओमा पेशी 96-वेल प्लेट्समध्ये सीड केल्या गेल्या आणि 12, 18 आणि 13 तासांवर नियंत्रण म्हणून BV2 (50 μg/mL) किंवा BV2 (50 μg/mL) पासून मिळवलेल्या टॉक्सोप्लाझ्मा-संक्रमित एक्सोसोम्समध्ये मिसळल्या. .सेल काउंटिंग किट-8 (डोजिंदो, कुमामोटो, जपान) (पूरक आकडे S1-S3) 46 वापरून सेल प्रसार दर निर्धारित केला गेला.
5-आठवड्याची मादी BALB/c नग्न उंदीर ओरिएंट बायो (Seongnam-si, दक्षिण कोरिया) येथून खरेदी करण्यात आली होती आणि खोलीच्या तापमानात (22±2°C) आणि आर्द्रता (45±15°C) वर वैयक्तिकरित्या निर्जंतुक पिंजऱ्यात ठेवण्यात आली होती.%) खोलीच्या तपमानावर (22±2°C) आणि आर्द्रता (45±15%).एसपीएफ (सोल नॅशनल युनिव्हर्सिटी स्कूल ऑफ मेडिसिन अॅनिमल सेंटर) अंतर्गत 12 तासांचे प्रकाश चक्र आणि 12 तासांचे गडद चक्र पार पाडण्यात आले.उंदरांना यादृच्छिकपणे प्रत्येकी 5 उंदरांच्या तीन गटांमध्ये विभागले गेले आणि सर्व गटांना 1 x 107 U87 ग्लिओमा पेशी असलेले 400 मिली पीबीएस आणि वाढ घटक कमी BD Matrigel™ (BD Science, Miami, FL, USA) सह त्वचेखालीलपणे इंजेक्शन दिले गेले.ट्यूमरच्या इंजेक्शननंतर सहा दिवसांनी, BV2 पेशींमधून (टॉक्सोप्लाझ्मा संसर्गासह/शिवाय) 200 मिलीग्राम एक्सोसोम्स ट्यूमर साइटवर इंजेक्शनने दिले गेले.ट्यूमरच्या संसर्गानंतर बावीस दिवसांनी, प्रत्येक गटातील उंदरांच्या ट्यूमरचा आकार कॅलिपरने आठवड्यातून तीन वेळा मोजला गेला आणि ट्यूमरची मात्रा सूत्रानुसार मोजली गेली: 0.5×(रुंदी)×2×लांबी.
miRCURYTM LNA miRNA अॅरे वापरून मायक्रोआरएनए एक्स्प्रेशन अॅनालिसिस, 7व्या पिढीने, mmu आणि rno अॅरे (EXIQON, Vedbaek, Denmark) 3100 मानव, माउस आणि उंदीर miRNA कॅप्चर प्रोबमधील 1119 चांगल्या वैशिष्ट्यीकृत उंदरांना कव्हर करते.या प्रक्रियेदरम्यान, 250 ते 1000 एनजी एकूण आरएनए 5′-फॉस्फेटमधून वासराच्या आतड्यांसंबंधी अल्कलाइन फॉस्फेटसह उपचार करून काढून टाकले गेले आणि त्यानंतर Hy3 ग्रीन फ्लोरोसेंट डाईने लेबलिंग केले गेले.लेबल केलेले नमुने नंतर हायब्रिडायझेशन चेंबर किट (Agilent Technologies, Santa Clara, CA, USA) आणि हायब्रिडायझेशन स्लाइड किट (Agilent Technologies) वापरून मायक्रोएरे स्लाइड लोड करून संकरित केले गेले.56 डिग्री सेल्सिअस तापमानात 16 तास हायब्रिडायझेशन केले गेले, त्यानंतर निर्मात्याच्या शिफारशींनुसार मायक्रोएरे धुतले गेले.प्रक्रिया केलेल्या मायक्रोएरे स्लाइड्स नंतर Agilent G2565CA मायक्रोएरे स्कॅनर सिस्टम (Agilent Technologies) वापरून स्कॅन केल्या गेल्या.स्कॅन केलेल्या प्रतिमा Agilent Feature Extraction सॉफ्टवेअर आवृत्ती 10.7.3.1 (Agilent Technologies) वापरून आयात केल्या गेल्या आणि सुधारित Exiqon प्रोटोकॉलच्या संबंधित GAL फाइलचा वापर करून प्रत्येक प्रतिमेची फ्लूरोसेन्स तीव्रता परिमाण करण्यात आली.सध्याच्या अभ्यासासाठी मायक्रोएरे डेटा अॅक्सेसेशन क्रमांक GPL32397 अंतर्गत GEO डेटाबेसमध्ये जमा केला जातो.
टोक्सोप्लाझ्मा संक्रमित RH किंवा ME49 स्ट्रेनच्या मायक्रोग्लियामधील परिपक्व एक्सोसोमल miRNAs च्या अभिव्यक्ती प्रोफाइलचे विविध नेटवर्क टूल्स वापरून विश्लेषण केले गेले.ट्यूमरच्या विकासाशी संबंधित miRNAs miRWalk2.0 (http://mirwalk.umm.uni-heidelberg.de) वापरून ओळखले गेले आणि 8.0 पेक्षा जास्त सामान्यीकृत सिग्नल तीव्रतेसह (लॉग2) फिल्टर केले गेले.miRNAs मध्ये, T. gondii ची लागण झालेल्या RH किंवा ME49 स्ट्रेन द्वारे बदललेल्या miRNAs च्या फिल्टर विश्लेषणाद्वारे विभेदितपणे व्यक्त miRNA 1.5 पट पेक्षा जास्त बदललेले आढळले.
Lipofectamine 2000 (Invitrogen, Carlsbad, CA, USA) वापरून ऑप्टी-MEM (Gibco, Carlsbad, CA, USA) मध्ये सहा-वेल प्लेट्स (3 x 105 पेशी/विहीर) मध्ये सेल सीड केले गेले.संक्रमण झालेल्या पेशींचे 6 तास संवर्धन केले गेले आणि नंतर ते माध्यम नवीन पूर्ण माध्यमात बदलले गेले.संक्रमणानंतर 24 तासांनी पेशींची कापणी केली जाते.
सांख्यिकीय विश्लेषण प्रामुख्याने एक्सेल सॉफ्टवेअर (मायक्रोसॉफ्ट, वॉशिंग्टन, डीसी, यूएसए) सह विद्यार्थ्यांची टी-टेस्ट वापरून केले गेले.प्रायोगिक प्राणी विश्लेषणासाठी, प्रिझम 3.0 सॉफ्टवेअर (GraphPad Software, La Jolla, CA, USA) वापरून द्वि-मार्गी ANOVA केले गेले. P-मूल्ये <0.05 सांख्यिकीयदृष्ट्या महत्त्वपूर्ण मानली गेली. P-मूल्ये <0.05 सांख्यिकीयदृष्ट्या महत्त्वपूर्ण मानली गेली. Значения P <0,05 считались статистически значимыми. पी मूल्ये <0.05 सांख्यिकीयदृष्ट्या महत्त्वपूर्ण मानली गेली. पी 值< 0.05 被认为具有统计学意义. पी 值< ०.०५ Значения P <0,05 считались статистически значимыми. पी मूल्ये <0.05 सांख्यिकीयदृष्ट्या महत्त्वपूर्ण मानली गेली.
या अभ्यासात वापरलेले सर्व प्रायोगिक प्रोटोकॉल सोल नॅशनल युनिव्हर्सिटी स्कूल ऑफ मेडिसिन (IRB क्रमांक SNU-150715-2) च्या संस्थात्मक पुनरावलोकन मंडळाने मंजूर केले.
The data used in this study are available upon reasonable request from the first author (BK Jung; mulddang@snu.ac.kr). And the microarray data for the current study is deposited in the GEO database under registration number GPL32397.
फर्ली, जे. आणि इतर.2018 मध्ये अंदाजित जागतिक कर्करोगाच्या घटना आणि मृत्यू: GLOBOCAN स्रोत आणि पद्धती.व्याख्या.जे. रक 144, 1941-1953 (2019).
रशीद, एस., रहमान, के. आणि आकाश, एमएस ब्रेन ट्यूमरच्या जोखीम घटक आणि त्यांच्या उपचारात्मक हस्तक्षेपांची अंतर्दृष्टी. रशीद, एस., रहमान, के. आणि आकाश, एमएस ब्रेन ट्यूमरच्या जोखीम घटक आणि त्यांच्या उपचारात्मक हस्तक्षेपांची अंतर्दृष्टी.रशीद, एस., रहमान, के. आणि आकाश, एमएस ब्रेन ट्यूमर आणि प्रमुख उपचारात्मक हस्तक्षेपांसाठी जोखीम घटकांचा आढावा. रशीद, एस., रहमान, के. आणि आकाश, एमएस 深入了解脑肿瘤的危险因素及其治疗干预措施. रशीद, एस., रहमान, के. आणि आकाश, एमएस ब्रेन ट्यूमर जोखीम घटक आणि उपचारात्मक हस्तक्षेपांची सखोल माहिती.रशीद, एस., रहमान, के. आणि आकाश, एमएस ब्रेन ट्यूमर आणि प्रमुख उपचारात्मक हस्तक्षेपांसाठी जोखीम घटकांचा आढावा.बायोमेडिकल सायन्स.फार्मासिस्ट.143, 112119 (2021).
काटो, आय., झांग, जे. अँड सन, जे. ह्युमन ओरोडायजेस्टिव्ह आणि फिमेल जननेंद्रियाच्या कर्करोगात बॅक्टेरिया-व्हायरल परस्परसंवाद: एपिडेमियोलॉजिक आणि प्रयोगशाळा पुराव्याचा सारांश. काटो, आय., झांग, जे. अँड सन, जे. ह्युमन ओरोडायजेस्टिव्ह आणि फिमेल जननेंद्रियाच्या कर्करोगात बॅक्टेरिया-व्हायरल परस्परसंवाद: एपिडेमियोलॉजिक आणि प्रयोगशाळा पुराव्याचा सारांश.काटो आय., झांग जे. आणि सन जे. मानवी गॅस्ट्रोइंटेस्टाइनल ट्रॅक्ट आणि मादी जननेंद्रियाच्या कर्करोगात बॅक्टेरिया-व्हायरल परस्परसंवाद: एपिडेमियोलॉजिकल आणि प्रयोगशाळा डेटाचा सारांश. काटो, आय., झांग, जे. आणि सन, जे. 人类口腔消化道癌和女性生殖道癌中的细菌-病毒相中的细菌-病毒相互央审茚滪黁夯夯夻央夯道作用： काटो, आय., झांग, जे. अँड सन, जे. मानवी मौखिक पोकळी पचन आणि स्त्री पुनरुत्पादक मार्गातील बॅक्टेरियो-व्हायरल परस्परसंवाद: लोकप्रिय रोग विज्ञान आणि प्रयोगशाळेच्या पुराव्याचा सारांश.काटो आय., झांग जे. आणि सन जे. मानवी गॅस्ट्रोइंटेस्टाइनल कर्करोग आणि महिला जननेंद्रियाच्या कर्करोगात बॅक्टेरिया-व्हायरल परस्परसंवाद: महामारी आणि प्रयोगशाळेतील डेटाचा सारांश.कर्करोग 14, 425 (2022).
मॅगोन, केएल आणि पॅरिश, जेएल संसर्गापासून कर्करोगापर्यंत: डीएनए ट्यूमर व्हायरस होस्ट सेल सेंट्रल कार्बन आणि लिपिड चयापचय कसे बदलतात. मॅगोन, केएल आणि पॅरिश, जेएल संसर्गापासून कर्करोगापर्यंत: डीएनए ट्यूमर व्हायरस होस्ट सेल सेंट्रल कार्बन आणि लिपिड चयापचय कसे बदलतात.महॉन, केएल आणि पॅरिश, जेएल फायर इन्फेक्शन टू कॅन्सर: डीएनए-आधारित ट्यूमर व्हायरस होस्ट सेल सेंट्रल कार्बन आणि लिपिड चयापचय कसे बदलतात. मॅगोन, केएल आणि पॅरिश, जेएल 从感染到癌症：DNA 肿瘤病毒如何改变宿主细胞的中心碳和脂质代谢。 मॅगोन, केएल आणि पॅरिश, जेएल संसर्गापासून कर्करोगापर्यंत: डीएनए ट्यूमर व्हायरस होस्ट सेल सेंट्रल कार्बन आणि लिपिड चयापचय कसे बदलतात.महॉन, केएल आणि पॅरिश, जेएल कॅन्सरला संसर्ग होतो: डीएनए ट्यूमर विषाणू यजमान पेशींमध्ये केंद्रीय कार्बन आणि लिपिड चयापचय कसे बदलतात.जीवशास्त्र उघडा.11, 210004 (2021).
कोरिया दा कोस्टा, जेएम आणि इतर.शिस्टोसोम्स आणि यकृत फ्ल्यूक्स आणि हेल्मिंथ-संबंधित कर्करोगाचे कॅटेकोल इस्ट्रोजेन्स.समोरआत गरम.५, ४४४ (२०१४).